Monkeypox Virus Real Time PCR Kit

1. VoorbeeldVersameling:Monster moet ooreenkomstig in steriele buise versamel word

met standaard tegniese spesifikasies.

2. Reagensvoorbereiding (Reagensvoorbereidingsarea)

Haal die komponente van die kit uit, balanseer dit by kamertemperatuur vir bystandgebruik.

3. Monsterverwerking (monsterverwerkingsarea)

3.1 Nukleïensuur ekstraksie

Dit word aanbeveel om 200μL vloeibare monsters, Positiewe Kontrole en Negatiewe Kontrole te neem vir nukleïensuurekstraksie, volgens die ooreenstemmende vereistes en prosedures van virale DNA-ekstraksiestelle.

3.2 Gevriesdroogde poeieroplossing en templaatbyvoeging

Berei Monkeypox Virus Gevriesdroogde voormengsel volgens die aantal monsters.Een monster benodig een PCR-buis wat gevriesdroogde voormengselpoeier bevat.Negatiewe beheer en positiewe beheer moet as twee monsters behandel word.

(1) Voeg 15μL oplosoplossing by elke PCR-buis wat gevriesdroogde voormengsel bevat, voeg dan 5μL geëxtraheerde monsters/ Negatiewe Kontrole/ Positiewe Kontrole onderskeidelik by elke PCR-buis by.

(2) Bedek PCR-buise styf, knip PCR-buise met die hand totdat gevriesdroogde poeier heeltemal opgelos en gemeng is, versamel die vloeistof na die onderkant van PCR-buise deur oombliklike laespoed sentrifugering.

(3) As u 'n gewone intydse PCR-instrument gebruik vir opsporing, dra dan PCR-buise direk na die versterkingsarea oor;As u BTK-8 vir opsporing gebruik, moet u die volgende bewerkings uitvoer: dra 10 μL vloeistof van PCR-buis oor na die reaksieskyfieput van BTK-8.Een PCR-buis stem ooreen met een put op die skyfie.Tydens pipetwerk, maak seker dat die pipet 90 grade vertikaal is.Die aërosolversperringspipetpunte moet met matige krag in die middel van die put geplaas word en ophou om die pipet te druk wanneer dit die eerste rat bereik (om borrels te vermy).Nadat die putte gevul is, haal 'n reaksieskyfie-membraan uit om alle putte te bedek en die skyfie word dan na die amplifikasie-opsporingsarea oorgeplaas.

4. PCR-versterking (opsporingsgebied)

4.1 Plaas die PCR-buise/reaksieskyfie in die reaksietenk en stel die name van elke reaksieput in die ooreenstemmende volgorde.

4.2 Instellings van opsporingsfluoressensie: (1) Monkeypox virus (FAM);(2) Interne Beheer (CY5).

4.3 Begin die volgende fietsryprotokol

Protokol van ABI7500, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S, QuantStudio:

 Protokol van BTK-8:

5. Resultate-analise (verwys asseblief na Instrument Gebruikershandleiding）

Na die reaksie sal die resultate outomaties gestoor word.Klik "Analiseer" om te ontleed, en die instrument sal outomaties Ct-waardes van elke monster in resultaatkolom interpreteer.Die negatiewe en positiewe beheerresultate moet voldoen aan die volgende "6. Kwaliteitbeheer".

6. Kwaliteitsbeheer

6.1 Negatiewe beheer: Geen Ct of Ct>40 in FAM-kanaal, Ct≤40 in CY5-kanaal met normale versterkingskurwe.

6.2 Positiewe beheer: Ct≤35 in FAM-kanaal met normale versterkingskurwe, Ct≤40 in CY5-kanaal met normale amplifikasiekurwe.

6.3 Die resultaat is geldig indien aan al die bogenoemde kriteria voldoen word.Andersins is die resultaat ongeldig.

Resultaat Interpretasie

Die volgende resultate is moontlik:

LET WEL: Indien ongeldige resultaat voorkom, moet die monster versamel en weer getoets word.